此文章轉載自：百代生物
siRNA轉染是分子生物學常見的實驗之一。在siRNA轉染實驗中，siRNA轉染試劑的選擇尤為關鍵，需要綜合考慮轉染試劑的轉染性能、細胞毒性和操作方便性。
目前，實驗室常用的siRNA轉染試劑品牌主要有賽默飛的Lipo3000、 RNAiMAX和百代生物的RFect與RFect V2。
其中，RNAiMAX是國際公認的siRNA轉染試劑權威產品，RFect是國產知名siRNA轉染試劑，RFect V2是RFect 的最新升級產品，很多實驗室反應其siRNA轉染性能非常優(yōu)異。
RNAiMAX與RFect V2比較，各自的siRNA轉染性能如何，本文擬簡要敘述如下。
一、siRNA轉染性能
siRNA轉染性能，無疑是評價一款siRNA轉染試劑實力的首要指標。不僅要看轉染陽性率，更要看基因沉默效率。
RFect V2的最大突破就是專門配置了Trans Enhancer，又叫siRNA轉染增強劑，可有效降低細胞膜的免疫排異反應的同時，顯著提升了siRNA轉染的效率，較升級前的RFect siRNA轉染試劑的轉染效率還可高出5-30%。
那它的轉染性能表現和RNAiMAX相比又如何呢？我們實驗室按照兩款試劑的說明書，以24孔板的推薦比例，在用于做體外質控的Hela細胞融合度達到30-50%時，
分別以1.5μL的RFect V2和1.5μL的RNAiMAX轉染試劑配制轉染復合物進行轉染，48h在熒光顯微鏡下觀察其轉染陽性率。
結果顯示，兩者的轉染陽性率都可達90以上，說明同等量的轉染試劑，RFect V2與RNAiMAX的轉染陽性率不相上下。
如果說轉染陽性率只是一個直觀的結果，并非是驗證兩者轉染性能的“金標準”，那么還需要通過RT-qPCR來檢測其基因沉默效率從而得出結論。
為此，我們將能夠敲降SSB基因的小干擾核酸分別通過RFect V2和RNAiMAX轉染進Hela細胞，利用RT-qPCR檢測轉染24h后SSB的mRNA表達水平。
如圖所示，使用RNAiMAX轉染的實驗組CT值分別為21.91、21.95，使用RFect V2實驗組的熒光定量檢測結果相比于RNAiMAX略高出0.13-0.14個CT值，兩者結果非常相近，表明RFect V2和RNAiMAX轉染siRNA沉默基因的效率基本一致。
二、細胞毒性
細胞死亡率對細胞轉染實驗結果的影響很大，尤其是我們在研究基因沉默效率時，死亡細胞的那部分也會表現為目標mRNA表達水平的降低，因此siRNA轉染試劑必須對細胞作用溫和，才能實現實驗結果的準確性與可靠性。
RFect V2使用了新型可降解納米材料，和升級前的RFect相比，細胞毒性更低，并且成分上區(qū)別于以陽離子脂質體為主要成分的RNAiMAX。
眾所周知，siRNA轉染試劑的毒性越低，其要求的轉染密度也越低。
在這方面，無論是RNAiMAX，還是RFect V2，都做到了轉染密度在30-50%時就能取得高效的轉染結果。
根據我們實驗室的數據，使用RNAiMAX轉染Hela細胞后，細胞死亡率約為10%左右，使用RFect V2轉染Hela細胞后，細胞死亡率只有5%左右，似乎還略優(yōu)于RNAiMAX。
可以說，RFect V2在細胞毒性方面的表現是令人驚喜的。
三、操作簡便性 以研究者的角度出發(fā)，實驗的簡便性也十分重要。主要看兩方面，一方面是需不需要特殊培養(yǎng)基，第二方面是需不需要換液。
特殊培養(yǎng)基一般是用來配制轉染復合物的，因為血清的存在往往會影響轉染復合物的形成，所以說必須使用減血清培養(yǎng)基或是無血清培養(yǎng)基。
RNAiMAX的說明書中就已明確指出需要使用Opti-MEM減血清培養(yǎng)基來稀釋轉染試劑和siRNA，而試劑盒內并不提供這種培養(yǎng)基，因此實驗者還需額外購買。
這方面，RFect V2盒內配置有專研的轉染增強劑，可完全替代無血清培養(yǎng)基，不僅提升了轉染效率，也省去了購買特殊培養(yǎng)基的開支，為研究者提供了便利。
在換液問題上，研究者要根據每個轉染試劑的說明書來。
RFect V2不僅有很強的抗血清干擾能力，無需在轉染前更換無血清培養(yǎng)基，而且由于對細胞毒性極低，因此也無需在轉染4-6h后進行換液，換液反而可能造成轉染效率降低。
RNAiMAX同樣在說明書中表明無需換液，但有些科研者在分享轉染經驗時還是建議轉染后4-6小時最好更換培養(yǎng)液，可能對于一些敏感的細胞如果不及時更換新鮮的培養(yǎng)基，細胞死亡率還是比較高的。
不過，對于大多數耐受性強的細胞，RNAiMAX還是有非常不錯的轉染效率的。因而，研究者在選擇使用RNAiMAX時，可根據細胞對轉染試劑的敏感度自行判斷是否需要換液。
總的來說，RFect V2在各方面都有媲美RNAiMAX的性能，對于研究者來說，確實是一個不錯的siRNA轉染試劑新選擇。
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